Bifunktionalisierte Fettsäuren zur Visualisierung und Identifizierung von Protein-Lipid-Interaktionen in lebenden Zellen

Authors

  • Dr. Per Haberkant,

    Corresponding author
    1. European Molecular Biology Laboratory, Meyerhofstraße 1, 69117 Heidelberg (Deutschland)
    2. Membrane Biochemistry & Biophysics, Biomolecular Mass Spectrometry & Proteomics Group, Developmental Biology, Bijvoet Center for Biomolecular Research, Utrecht University, 3584 CH Utrecht (Niederlande)
    • European Molecular Biology Laboratory, Meyerhofstraße 1, 69117 Heidelberg (Deutschland)
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  • Dr. Reinout Raijmakers,

    1. Membrane Biochemistry & Biophysics, Biomolecular Mass Spectrometry & Proteomics Group, Developmental Biology, Bijvoet Center for Biomolecular Research, Utrecht University, 3584 CH Utrecht (Niederlande)
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  • Dr. Marjolein Wildwater,

    1. Membrane Biochemistry & Biophysics, Biomolecular Mass Spectrometry & Proteomics Group, Developmental Biology, Bijvoet Center for Biomolecular Research, Utrecht University, 3584 CH Utrecht (Niederlande)
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  • Timo Sachsenheimer,

    1. Biochemie-Zentrum der Universität Heidelberg (Deutschland)
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  • Priv.-Doz. Dr. Britta Brügger,

    1. Biochemie-Zentrum der Universität Heidelberg (Deutschland)
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  • Dr. Kenji Maeda,

    1. European Molecular Biology Laboratory, Meyerhofstraße 1, 69117 Heidelberg (Deutschland)
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  • Dr. Martin Houweling,

    1. Department of Biochemistry and Cell Biology, Faculty of Veterinary Medicine, Utrecht (Niederlande)
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  • Dr. Anne-Claude Gavin,

    1. European Molecular Biology Laboratory, Meyerhofstraße 1, 69117 Heidelberg (Deutschland)
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  • Priv.-Doz. Dr. Carsten Schultz,

    1. European Molecular Biology Laboratory, Meyerhofstraße 1, 69117 Heidelberg (Deutschland)
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  • Prof. Gerrit van Meer,

    1. Membrane Biochemistry & Biophysics, Biomolecular Mass Spectrometry & Proteomics Group, Developmental Biology, Bijvoet Center for Biomolecular Research, Utrecht University, 3584 CH Utrecht (Niederlande)
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  • Prof. Albert J. R. Heck,

    1. Membrane Biochemistry & Biophysics, Biomolecular Mass Spectrometry & Proteomics Group, Developmental Biology, Bijvoet Center for Biomolecular Research, Utrecht University, 3584 CH Utrecht (Niederlande)
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  • Prof. Joost C. M. Holthuis

    1. Membrane Biochemistry & Biophysics, Biomolecular Mass Spectrometry & Proteomics Group, Developmental Biology, Bijvoet Center for Biomolecular Research, Utrecht University, 3584 CH Utrecht (Niederlande)
    2. Molekulare Zellbiologie, Universität Osnabrück (Deutschland)
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  • Wir danken für die Unterstützung: dem EMBL-Interdisciplinary-Postdoc(EIPOD)-Stipendium cofinanziert durch Marie-Curie-COFUND (P.I.), dem Netherlands Proteomics Center (NPC) als Teil der Netherlands Genomics Initiative für die Unterstützung in Form eines NPC Valorization Vouchers (P.H.), dem 7. FP Marie-Curie ITN “SPHINGONET” der Europäischen Union (C.S., A.J.R.H., J.C.M.H.) und dem TRR83 der DFG (B.B., C.S.). K.M. war Stipendiat des Danish Natural Science Research Council (09-064986/FNU). Wir danken Y. Horibata, H. Sugimoto und S. Cockcroft für Plasmide, Cees Versluis für hochaufgelöste Massenspektren sowie Hedwich Vlieg, Harmen Dijkstra und Thomas Klimeck für technische Unterstützung.

Abstract

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Klickt's? Zellen bauen extern zugegebene photoaktivierbare und für Klick-Reaktionen geeignete Fettsäuren in verschiedenste bifunktionalisierte Phospholipide ein. Diese können durch UV-Bestrahlung mit ihren Protein-Bindungspartnern kovalent vernetzt werden. Die anschließende Markierung der „klickbaren“ Gruppe mit einem Reportermolekül ermöglicht die Identifizierung oder Visualisierung von Protein-Lipid-Interaktionen (siehe Schema).

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