Staining for soybean lipoxygenase activity in electrophoretic gels

Authors


Abstract

A staining method for lipoxygenase in electrophoretic gels is described which is based on the staining of hydroperoxides, as reaction products of added substrates, by N,N-dimethyl-p-phenylenediamine. Soybean lipoxygenase (EC 1.13.11.12) was detected after gel electrophoresis for anodic proteins under non-denaturating conditions and was compared to soybean lipoxygenase stained by Coomassie Brilliant Blue. Specifity of the method was checked by use of heat-denaturated lipoxygenase, tyrosinase and substrate absence. Staining intensity has been found to be proportional to the enzyme activity.

Abstract

Aktivitätsnachweis von Lipoxygenase auf Elektrophoresegelen. Eine Anfärbemethode für Lipoxygenase im Elektrophoresegel wurde entwickelt, basierend auf der Anfärbung von Hydroperoxiden - gebildet aus zugesetztem Substrat - mit N,N-Dimethyl-p-phenylen-diamin. Sojabohnen-Lipoxygenase (EC 1.13.11.12) wurde nach Gelelektrophorese für anodische Proteine unter nicht-denaturierenden Bedingungen mit dieser Methode lokalisiert und mit Sojabohnen-Lipoxygenase, die mit Coomassie-Brilliantblau angefärbt worden war, verglichen. Die Spezifität der Methode wurde überprüft durch Verwendung hitzedenaturierter Lipoxygenase, Färbung ohne Substratzugabe und Vergleich mit Tyrosinase. Weiterhin konnte die Proportionalität der Färbungsintensität zur Enzymaktivität nachgewiesen werden.

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