Clinical value of anti-live Leishmania (Viannia) braziliensis immunoglobulin G subclasses, detected by flow cytometry, for diagnosing active localized cutaneous leishmaniasis

Authors


Corresponding Author Olindo Assis Martins-Filho, Laboratório de Doença de Chagas, Centro de Pesquisas René Rachou – CPqRR, Fundação Oswaldo Cruz -FIOCRUZ/BH, Avenida Augusto de Lima 1715, Barro Preto, Belo Horizonte 30190-002, Brazil. Tel.: +55 21 31 3295-3566; Fax: +55 21 31 3295-3115; E-mail: oamfilho@cpqrr.fiocruz.br

Summary

objective To evaluate the clinical value of flow cytometry anti-live promastigate antibody (FC-ALPA), for diagnosing active cutaneous leishmaniasis.

method Serum samples from 145 individuals living in endemic areas for localized cutaneous leishmaniasis (population 1) were classified as having the disease or not and then tested for their IgG reactivity by indirect immunofluorescence assay and FC-ALPA-IgG. The results of FC-ALPA-IgG were expressed as percentage of positive fluorescent parasite. Both tests were also evaluated in serum samples of people with visceral leishmaniasis and Chagas disease (population 1A).

results In population 1, FC-ALPA-IgG performed better than the immunofluorescence assay regarding sensitivity, specificity and predictive values. Analysis of the results according to the likelihood ratios indicated that a percentage of positive fluorescent parasite ≤60 practically excludes the diagnosis of localized cutaneous leishmaniasis (likelihood ratio = 0.07), whereas at >60% it reinforces diagnosis of the disease (likelihood ratio = 7.0). Immunofluorescent assay is of little value (likelihood ratio = 2.04). In population 1A, both tests performed worse, but FC-ALPA-IgG achieved better statistical indexes than immunofluorescent assay.

conclusion The FC-ALPA-IgG is a valuable method for serological diagnosis of localized cutaneous leishmaniasis. FC-ALPA-IgG1/ALPA-IgG2 combined analysis is an additional serological tool for discriminating localized visceral leishmaniasis, Chagas disease and visceral leishmaniasis in areas where these infections co-exist.

Abstract

Objectif  Evaluer une approche par flow cytometrie pour la détection d'anticorps (FC-ALPA) anti- promastigotes vivants de Leishmania (V.) braziliensis.

Méthodes  Des échantillons de sérum de 145 individus vivant dans des régions endémiques de la leishmaniose cutanée localisée (population 1) ont été classés comme ayant la maladie ou pas, puis testés pour leur réaction à l'IgG par d'immunofluorescence indirecte et par FC-ALPA-IgG. Les résultats de FC-ALPA-IgG ont été exprimés en pourcentage de parasites fluorescents positifs. Les tests ont aussi étéévalués sur des échantillons de sérum de personnes ayant la leishmaniose viscérale et la maladie de Chagas (population 2).

Résultats  Dans la population 1, FC-ALPA-IgG était plus performante que le test d'immunofluorescence pour ce qui est de la sensitivité, de la spécificité et des valeurs prédictives. L'analyse des résultats selon les rapports de probabilité indiquait qu'un pourcentage de parasites fluorescents positifs ≤60 excluait pratiquement le diagnostic de la leishmaniose cutanée localisée (rapport de probabilité = 0,07), alors qu’à≥60%, il renforçait le diagnostic de la maladie (rapport de probabilité = 7,0). Le test d'immunofluorescence était moins bénéfique (rapport de probabilité = 2,04). Dans la population 2, tous les deux tests étaient moins performantes, mais FC-ALPA-IgG atteignait de meilleurs indexes statistiques que l'immunofluorescence.

Conclusion  FC-ALPA-IgG est une méthode valable pour le diagnostic sérologique de la leishmaniose cutanée localisée. L'analyse combinée FC-ALPA-IgG1/ALPA-IgG2 est un outil sérologique additionnel pour la distinction entre la leishmaniose cutanée localisée, la maladie de Chagas et la leishmaniose viscérale dans les régions ou ces coinfections existent.

Abstract

Objetivo  Evaluar la citometría de flujo para detectar anticuerpos (FC-ALPA) contra promastigotes vivos de Leishmania (V.) braziliensis promastigotes.

Método  Se clasificaron como teniendo enfermedad o no los sueros de 145 individuos provenientes de áreas endémicas para leishmaniasis cutánea localizada (Población 1) y fueron luego examinados para la reactividad IgG por inmunofluorescencia indirecta y FC-ALPA-IgG. Los resultados de FC-ALPA-IgG se expresaron como porcentaje de parásitos fluorescentes positivos. Ambas pruebas fueron también evaluadas con sueros de personas con leishmaniasis visceral y enfermedad de Chagas (Población 2).

Resultados  En la Población-1, el FC-ALPA-IgG se desempeñó mejor con respecto a la sensibilidad, especificidad y valor predictivo positivo. El análisis de los resultados de acuerdo con las tasas de verosimilitud indicaron que el porcentaje de parásitos positivos fluorescentes <= 60 prácticamente excluye el diagnóstico de leishmaniasis cutánea localizada (tasa de verosimilitud = 0007) mientras que >60% apoya el diagnóstico de la enfermedad (tasa de verosimilitud = 7.0). El ensayo de inmunofluorescencia es de poco valor (tasa de verosimilitud = 2.04). En la población 2, ambas pruebas tuvieron un peor desempeño, pero el FC-ALPHA-IgG logró mejores índices estadísticos que el ensayo de inmunofluerecencia.

Conclusión  El FC-ALPA-IgG es un método valioso para el diagnóstico serológico de la leishmaniasis cutánea localizada. Un análisis combinado FC-ALPA-IgG1/ALPA-IgG2 es una herramienta serológica adicional para discriminar la leishmaniasis visceral localizada, la enfermedad de Chagas y la leishmaniasis cutánea en áreas en las que estas infecciones coexisten.

Ancillary