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Keywords:

  • leishmaniasis;
  • trypanosomiais;
  • diagnostics;
  • nucleic acid sequence–based amplification;
  • polymerase chain reaction;
  • oligochromatography
  • leishmaniose;
  • trypanosomiase;
  • diagnostic;
  • NASBA;
  • PCR;
  • oligochromatographie
  • Leishmaniasis;
  • tripanosomiasis;
  • diagnóstico;
  • NASBA;
  • PCR;
  • oligocromatografía

Summary

Objective  To evaluate the repeatability and reproducibility of four simplified molecular assays for the diagnosis of Trypanosoma brucei spp. or Leishmania ssp. in a multicentre ring trial with seven participating laboratories.

Methods  The tests are based on PCR or NASBA amplification of the parasites nucleic acids followed by rapid read-out by oligochromatographic dipstick (PCR-OC and NASBA-OC).

Results  On purified nucleic acid specimens, the repeatability and reproducibility of the tests were Tryp-PRC-OC, 91.7% and 95.5%; Tryp-NASBA-OC, 95.8% and 100%; Leish-PCR-OC, 95.9% and 98.1%; Leish-NASBA-OC, 92.3% and 98.2%. On blood specimens spiked with parasites, the repeatability and reproducibility of the tests were Tryp-PRC-OC, 78.4% and 86.6%; Tryp-NASBA-OC, 81.5% and 89.0%; Leish-PCR-OC, 87.1% and 91.7%; Leish-NASBA-OC, 74.8% and 86.2%.

Conclusion  As repeatability and reproducibility of the tests were satisfactory, further phase II and III evaluations in clinical and population specimens from disease endemic countries are justified.

Répétabilité et reproductibilité de la PCR et du NASBA suivis de l’oligochromatographie pour le diagnostic moléculaire de Trypanosoma brucei et Leishmania

Objectif:  Evaluer la répétabilité et la reproductibilité de quatre tests moléculaires simplifiés pour le diagnostic de Trypanosoma brucei spp. ou Leishmania ssp. dans un essai multicentrique avec 7 laboratoires participants.

Méthodes:  Les tests sont basés sur l’amplification par PCR ou NASBA des acides nucléiques des parasites suivie par la lecture rapide sur bandelette oligochromatographique (PCR-OC et NASBA-OC).

Résultats:  Sur les échantillons d’acide nucléique purifié, la répétabilité et la reproductibilité des tests ont été les suivantes: Tryp-PRC-OC, 91,7% et 95,5%; Tryp-NASBA-OC, 95,8% et 100%; Leish-PCR-OC, 95,9% et 98,1%; Leish-NASBA-OC, 92,3% et 98,2%. Sur les échantillons de sang mélangés avec des parasites la répétabilité et la reproductibilité des tests ont été les suivantes: Tryp-PRC-OC, 78,4% et 86,6%; Tryp-NASBA-OC, 81,5% et 89,0%; Leish-PCR-OC, 87,1% et 91,7%; Leish-NASBA-OC, 74,8% et 86,2%.

Conclusion:  As repeatability and reproducibility of the tests were satisfactory, further phase II and III evaluations in clinical and population specimens from disease endemic countries are justified.

Conclusion:  Comme la répétabilité et la reproductibilité des tests étaient satisfaisantes, des évaluations ultérieures de phase II et III sur des échantillons cliniques provenance de populations des pays endémiques sont justifiées.

Repetibilidad y reproductibilidad de la PCR y el NASBA con oligocromatografía posterior para el diagnóstico molecular de Trypanosoma brucei y Leishmania

Objetivo:  Evaluar la repetibilidad y reproductibilidad de cuatro ensayos moleculares simplificados para el diagnóstico de Trypanosoma brucei spp. o Leishmania ssp. en un ensayo multicéntrico con la participación de 7 laboratorios.

Métodos:  Las pruebas estaban basadas en la amplificación de los ácidos nucléicos del parásito mediante PCR o NASBA, y seguidos por una lectura rápida con una tira diagnóstica oligocromatográfica (PCR-OC y NASBA-OC).

Resultados:  En muestras de ácido nucléico purificado, la repetibilidad y reproductibilidad de las pruebas fueron: Tryp-PRC-OC, 91.7% y 95.5%; Tryp-NASBA-OC, 95.8% y 100%; Leish-PCR-OC, 95.9% y 98.1%; Leish-NASBA-OC, 92.3% y 98.2%. En muestras de sangre con parásitos, la repetibilidad y reproducibilidad de las pruebas fueron: Tryp-PRC-OC, 78.4% y 86.6%; Tryp-NASBA-OC, 81.5% y 89.0%; Leish-PCR-OC, 87.1% y 91.7%; Leish-NASBA-OC, 74.8% y 86.2%.

Conclusión:  Puesto que las pruebas de repetibilidad y reproducibilidad fueron satisfactorias, se justifica el realizar más pruebas de evaluación, de fase II y III en muestras clínicas y de población provenientes de países endémicos.