The expression of histamine H4 receptor mRNA in the skin and other tissues of normal dogs

Authors


  • Some of these data were published as an abstract in Veterinary Dermatology 2010; 21: 326 and presented at the North American Veterinary Dermatology Forum.

  • Sources of Funding
    This project was supported by the University of Minnesota Small Animal Companion Grant, College of Veterinary Medicine, University of Minnesota.

  • Conflict of Interest
    No conflicts of interest have been declared.

Sheila M. F. Torres, Department of Veterinary Clinical Sciences, College of Veterinary Medicine, C339 Veterinary Teaching Hospital, 1352 Boyd Avenue, St Paul, MN 55108, USA. E-mail: torre009@umn.edu

Abstract

The histamine 4 (H4) receptor was first cloned and characterized in 2000 using the human H3 receptor DNA sequence. The H4 receptor has been shown to participate in various aspects of inflammation, such as chemotaxis, upregulation of adhesion molecule expression and modulation of cytokine secretion. The primary goal of this study was to determine whether H4 receptor mRNA is expressed in normal canine skin by performing an RT-PCR. An additional goal was to determine the expression of this receptor in the colon, liver, spleen and kidney. Tissues were collected from five healthy, young-adult pit bull dogs. Samples were immediately placed in RNAlater® solution and stored at −20°C until processed. The amplified products in all skin samples in addition to the colon, liver, spleen and kidney (variable expression) had the expected size of 400–500 bp. The sequenced amplicons matched the National Center for Biotechnology Information published sequence for the canine H4 receptor. The study results showed that canine normal skin expresses the H4 receptor mRNA. Further studies using immunohistochemistry should be conducted to demonstrate the expression of the H4 receptor at the protein level and to localize the expression of this receptor in the skin.

Résumé

Le récepteur de l’histamine 4 (H4) a été cloné et caractérisé pour la première fois en 2000 en utilisant la séquence d’ADN du récepteur H3 humain. Il a été montré que ce récepteur participait à différents aspects de l’inflammation tels que le chimiotactisme, l’augmentation de l’expression de molécules d’adhésion et la modulation de sécrétion de cytokines. L’objectif primaire de cette étude était de déterminer par RT-PCR (reverse transcription-polymerase chain reaction) si l’ARNm de récepteur H4 est exprimé dans la peau normale de chien. Un objectif supplémentaire était de déterminer l’expression de ce récepteur dans le colon, le fois, la rate et les reins. Les tissus ont été prélevés sur 5 jeunes chiens pit bull en bonne santé. Les échantillons ont été immédiatement placés dans une solution RNAlater® et stockés à -20 °C jusqu’à leur traitement. Les produits amplifiés dans tous les échantillons cutanés en plus de l’expression variable dans le colon, le foie, la rate et les reins, avaient la taille attendue de 400 à 500 paires de base. Les amplicons séquencés correspondaient à la séquence publiée du NCBI pour le récepteur H4. Les résultats de cette étude montrent que la peau canine normale exprime l’ARNm du récepteur H4. D’autres études immunohistochimiques devraient être menées pour démontrer l’expression du récepteur H4 à un niveau protéique et localiser l’expression de ce récepteur dans la peau.

Resumen

El receptor de histamina 4 (H4) fue clonado y caracterizado por primera vez en el año 2000 utilizando la secuencia de DNA del receptor H3 humano. Este receptor ha mostrado participar en varios aspectos de la inflamación tales como la quimiotaxis, incremento de la expresión de moléculas de adhesión y modulación de la secreción de citoquinas. El primer objetivo de este estudio fue determinar si el mRNA del receptor H4 es expresado en piel normal de perro mediante reacción de polimerasa en cadena de transcripción reversa (RT-PCR). Otro objetivo fue determinar la expresión del receptor en el colon, hígado, bazo y riñón. Los tejidos se obtuvieron de cinco perros jóvenes de raza Pitbull sanos. Las muestras se pusieron de inmediato en solución RNAlater® y se almacenaron a temperatura de −20 °C hasta su procesamiento. Los productos amplificados en todas la muestras de piel, además del colon, hígado, bazo y riñón (con expresión variable) tenían el tamaño esperado de 400-500 pares de bases. Los amplicones secuenciados fueron equivalentes a la secuencia publicada en NCBI para el receptor H4 canino. Los resultados de este estudio muestran que la piel normal de perro expresa mRNA del receptor H4. Se necesitan mas estudios utilizando inmunohistoquímica para demostrar la expresión del receptor H4 a nivel proteico y localizar la expresión del receptor en la piel.

Zusammenfassung

Der Histamin4 (H4) Rezeptor wurde erstmals im Jahr 2000 geklont und unter Verwendung der DNA Sequenz des humanen H3 Rezeptors charakterisiert. Es wurde gezeigt, dass dieser Rezeptor bei einigen Aspekten der Entzündung, wie bei der Chemotaxis, bei der Erhöhung der Expression von Adhäsionsmolekülen und bei der Modulierung der Zytokinsekretion eine Rolle spielt. Es war das Hauptziel dieser Studie mittels der Reversen Transkriptase-Polymerase-Kettenreaktion (RT-PCR) eine Expression der mRNA des H4 Rezeptors in normaler Hundehaut zu bestimmen. Ein zusätzliches Ziel war es, die Expression dieses Rezeptors im Kolon, in der Leber, Milz und Niere zu bestimmen. Es wurden Gewebeproben von fünf gesunden, jungen erwachsenen Pitbullterriern entnommen. Die Proben wurden sofort in RNAlater® Lösung gegeben und bis zur Verarbeitung bei −20 °C gelagert. Die amplifizierten Produkte aus den Hautproben, sowie aus Kolon, Leber, Milz und Niere (variable Expression) hatten die erwartete Größe von 400-500 Basenpaaren. Die sequenzierten Amplikons stimmten mit den bei NCBI publizierten Sequenzen für den caninen H4 Rezeptor überein. Die Ergebnisse der Studie bestätigten die Expression der H4 Rezeptor mRNA in normaler Hundehaut. Weitere Studien, die Immunhistochemie verwenden, sind nötig, um die Expression des H4 Rezeptors auf dem Proteinlevel zu demonstrieren und um die Expression dieses Rezeptors in der Haut zu lokalisieren.

Abstract

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