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Abstract

Chemical stability and in vitro bactericidal efficacy of 0.9% enrofloxacin-compounded solutions were evaluated following storage at room temperature for 28 days. Chemical stability of enrofloxacin was determined by high-performance liquid chromatography (HPLC) in five compounded solutions, including sterile water. Bactericidal efficacy was determined by spiral plating serial 10-fold dilutions of bacteria and solutions followed by colony counts. Tris–EDTA [TrizEDTA® (TE)], Tris–EDTA and 0.15% chlorhexidine [TrizChlor® (TC)], 2.5% lactic acid, 0.1% salicylic acid and 0.1% parachlorometaxylenol [Epi-Otic (EO)], and 0.1% free salicylic acid, 0.1% parachlorometaxylenol and 0.5% EDTA [Epi-Otic Advanced (EA)] were used. High-performance liquid chromatography was carried out with one-step liquid/liquid extraction to detect and quantify enrofloxacin stability. Mean recoveries for compounded samples run in triplicate at 28 days were 97.7% (TE), 99.9% (TC), 98.1% (EO) and 97.8% (EA). Kruskal–Wallis analysis showed no significant difference in the percentage recovery (H = 0.0539, df = 3, P = 0.9967). American Type Culture Collection strains of Staphylococcus pseudintermedius and Pseudomonas aeruginosa were used to evaluate in vitro efficacy following 30 min incubation on days 0, 14 and 28. Consistent in vitro bactericidal efficacy of all compounded solutions, indicated by killing >2.3 × 107 colony-forming units/mL, was seen; however, bactericidal efficacy decreased for compounded TC on day 14. Pseudomonas aeruginosa was more sensitive to the ear cleaners and enrofloxacin than S. pseudintermedius. The HPLC and in vitro data suggest that 0.9% enrofloxacin compounded with sterile water, TE, EO and EA maintains chemical stability and bactericidal efficacy for 28 days.

Résumé

La stabilité chimique et l’activité bactéricide in vitro de solutions composées à 0.9% d’enrofloxacine, ont étéévaluées après stockage à température ambiante pendant 28 jours. La stabilité chimique de l’enrofloxacine a été déterminée par HPLC dans 5 solutions y compris dans l’eau stérile. L’activité bactéricide a été déterminée par ensemencement de plateau en spirale de dilutions de bactéries au dixième et des solutions suivi par un comptage des colonies. Tris-EDTA [TrizEDTA® (TE): DermaPet, Potomac, MD, USA], tris-EDTA et 0.15% chlorhexidine [TrizChlor® (TC): DermaPet, Potomac, MD, USA], 2.5% acide lactique, 0.1% acide salicylique et 0.1% parachlorometaxylenol [Epi-Otic (EO): Virbac, Fort Worth, TX, USA], et 0.1% acide salicylique libre, 0.1% PCMX, et 0.5% EDTA [Epi-Otic Advanced (EA): Virbac, Fort Worth, TX, USA] ont été utilisé. La HPLC a été effectuée avec une étape liquide/extraction de liquide pour détecter et quantifier la stabilité de l’enrofloxacine. Les rétablissements moyens pour les échantillons composés, effectués trois fois, à 28 jours étaient 97.7% (TE), 99.9% (TC), 98.1% (EO) et 97.8% (EA). Des analyses de Kruskal-Wallis n’ont montré aucune différence significative en pourcentage de rétablissement (H = 0.0539, df = 3, P = 0.9967). Les souches ATCC de Staphylococcus pseudintermedius et Pseudomonas aeruginosa ont été utilisées pour évaluer l’efficacitéin vitro après 30 minutes d’incubation à jours 0, 14 et 28. Une activité bactéricide régulière de toutes les solutions composées a été observée (bactéricidie supérieure à 2.3 × 107 CFU/mL), bien que la bactéricidie du composé TC a diminuéà jour 14. P. aeruginosaétait plus sensible aux nettoyants auriculaires et à l’enrofloxacine que S. pseudintermedius. Les données de HPLC et les données in vitro suggèrent que les composés à 0.9% d’enrofloxacine avec de l’eau distillée, TE, EO et EA ont une activité bactéricide et une stabilité chimique constantes pendant 28 jours.

Resumen

Se evaluaron la estabilidad química y la eficacia bactericida in vitro de soluciones de enrofloxacina al 0,9% tras su almacenaje a temperatura ambiente durante 28 días. La estabilidad química de la enrofloxacina fue determinada por HPLC en 5 soluciones compuestas, siendo una agua estéril. La eficacia bactericida fue determinada en diluciones decimales seriadas de bacterias en soluciones, sembradas en placas con técnica en espiral, seguido por recuento de colonias. Se utilizaron Tris-EDTA [TrizEDTA® (TE): DermaPet, Potomac, MD, E.E.U.U.], tris-EDTA y 0,15% clorhexidina [TrizChlor® (TC): DermaPet, Potomac, MD, E.E.U.U.], 2,5%ácido láctico, 0,1% acido salicílico, y 0,1% paraclorometaxilenol (Epi-Otic (EO): Virbac, Fort Worth, TX, E.E.U.U.), y 0,1%ácido salicílico libre, 0,1% PCMX, y 0,5% EDTA [Epi-Otic Advanced (EA): Virbac, Fort Worth, TX, E.E.U.U.]. El HPLC fue realizado con técnica en un solo paso de extracción de líquido a líquido para detectar y para cuantificar la estabilidad de la enrofloxacina. Los valores medios para los compuestas realizadas por triplicado a los 28 días fueron 97,7% (TE), 99,9% (TC), 98,1% (EO) y 97,8% (EA). El análisis de Kruskal-Wallis no demostró ninguna diferencia significativa en el porcentaje recuperado (H = 0,0539, df = 3, P = 0,9967). Cepas procedentes del ATCC de Staphylococcus pseudintermedius y Pseudomonas aeruginosa se utilizaron para evaluar la eficacia in vitro tras incubación de 30 minutos en los días 0, 14 y 28. Se observó una eficacia bactericida constante in vitro de todas las soluciones compuestas, indicada por una destrucción de más de 2,3 × 107 CFU/mL. Sin embargo, la eficacia bactericida disminuyó para la mezcla TC en el día 14. P. aeruginosa fue más sensible a los limpiadores óticos y a la enrofloxacina que S. pseudintermedius. Los resultados de HPLC y los datos in vitro sugieren que compuestos con 0,9% de enrofloxacina compuestos en agua estéril, TE, EO y EA mantienen la estabilidad química y la eficacia bactericida durante 28 días.

Zusammenfassung

Die chemische Stabilität und die bakterizide Wirksamkeit von 0,9%igen Enrofloxacin kompoundierten Lösungen in vitro wurde nach einer 28-tägigen Lagerung bei Raumtemperatur evaluiert. Die chemische Stabilität von Enrofloxacin wurde mittels HPLC in fünf kompoundierten Lösungen sowie in sterilem Wasser bestimmt. Die bakterizide Wirksamkeit wurde mittels 10-fach Verdünnungen der Bakterien und Lösungen in Spiralplatten bestimmt, wonach die Kolonien ausgezählt wurden. Tris-EDTA [TrizEDTA® (TE): DermaPet, Potomac, MD, USA], tris-EDTA und 0,15%iges Chlorhexidin [TrizChlor® (TC): DermaPet, Potomac, MD, USA], 2,5%ige Milchsäure, 0,1%ige Salizylsäure, und 0,1%iges Parachlorometaxylenol [Epi-Otic (EO): Virbac, Fort Worth, TX, USA], und 0,1%ige freie Salizylsäure, 0,1%ige PCMX und 0,5%ige EDTA [Epi-Otic Advanced (EA): Virbac, Fort Worth, TX, USA] wurden verwendet. HPLC wurde mit mittels Flüssig/Flüssig Extraktion in einem Schritt durchgeführt, um die Stabilität von Enrofloxacin zu beobachten und zu quantifizieren. Die durchschnittliche Ausbeute der kompoundierten Proben, die am 28. Tag in dreifacher Form bestimmt wurde, betrug 97,7% (TE), 99,9% (TC), 98,1% (EO) und 97,8% (EA). Ein Kruskal-Wallis Test zeigte keine Unterschiede in der prozentuellen Ausbeute (H = 0,0539, df = 3, P = 0,9967). ATCC Stämme von Staphylococcus pseudointermedius und Pseudomonas aeruginosa wurden verwendet, um die in vitro Wirksamkeit nach 30 minütiger Inkubation an den Tagen 0, 14 und 28 zu bestimmen. Eine beständige in vitro Wirksamkeit aller kompoundierten Lösungen, die durch ein Abtöten von mehr als 2,3 × 107 CFU/mL gekennzeichnet war, wurde festgestellt, wobei die bakterizide Wirksamkeit für kompoundiertes TC am Tag 14 abnahm. P. aeruginosa war empfindlicher auf die Ohrreiniger und Enrofloxacin als S. pseudointermedius. HPLC und die in vitro Daten weisen darauf hin, dass kompoundiertes 0,9%iges Enrofloxacin kompoundiert mit sterilem Wasser, TE, EO und EA seine chemische Stabilität und bakterizide Wirksamkeit für 28 Tage behält.

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