Purification and properties of gamma-glutamyl transpeptidase from human testis

Reinigung und Eigenschaften von Gamma-Glutamyl-transpeptidase aus menschlichem Hoden

Authors


Department of Urology, Saitama Medical Center of Saitama Medical School, 1981 Tsujido, Kamoda, Kawagoe, Saitama 350/Japan.

Abstract

Summary Gamma-glutamyl transpeptidase was purified to apparent homogeneity from human testis by DEAE cellulose, acetone, precipitation, fractionation by ammonium sulphate, Sephacryl S-200 chromatography, Q-Sepharose chromatography and S-Sepharose chromatography following solubilization of the enzyme by Triton X-100. The purified enzyme had an apparent molecular weight of 54 KDa by Sephacryl S-200 gel filtration. On sodium dodecyl sulphate polyacrylamide gel electrophoresis, two submits of molecular weight 38 KDa and 14 KDa were obtained. The purified enzyme showed a single band with pI 6.0. The Km value and the optimal pH of the enzyme for L-γ-glutamyl-3-carboxy-4-nitroanilide were found 1.09 mmol/l and 8.2–8.5, respectively. Serial lectin binding study with various lectin columns showed that the majority of the asparagine-linked oligosaccharides of the enzyme was complex-types. However, complex-types with bisecting N-acetylglucosamine residue were not recognized.

Zusammenfassung Aus dem menschlichen Hoden wurde Gamma-Glutamyltranspeptidase (GGTP) bis zur offenbaren Homogenität mittels verschiedener Verfahren gereinigt. Das gereinigte Enzym hatte ein offensichtliches Molekulargewicht von 54 KDa bei Sephacryl S-200 Gelfiltration. Bei Natrium-dodecylsulfat-polyacrylamid-Gelelektrophorose konnten zwei Untereinheiten des Mol. Gewichtes von 38 KDa und 14 KDa ermittelt werden. Es wurde eine Einzelbande von pI 6, 0 festgestellt. Der Km-Wert und der optimale pH des Enzyms für L-gamma-glutamyl-3-carboxy-4-nitroanilid wurde bei 8, 2–8, 5 für 1, 09 mmol/l gefunden. Serienmäßige Lectin-Bindungs-Studie mit verschiedenen Lectin-Kolumnen ergab die Mehrzahl der Asparagin-gekoppelten Oligosaccharide des Enzyms vom Komplextypus. Nichtsdestoweniger konnten keine Komplextypen mit halbierten N-acetyl-glukosaminresten erkannt werden.

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