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Summary

In Macedonia, hypoviruses in the chestnut blight fungus, Cryphonectria parasitica, were first identified in 1995, more than 20 years after the discovery of chestnut blight. Between 1995 and 2000, 488 isolates of the fungus were collected from 19 sites throughout Macedonia. These isolates were screened for hypoviruses by extraction of double-stranded RNA (dsRNA) and electrophoresis on agarose gels. We found dsRNA of approximately 12 kb in length in 95 isolates in eight subpopulations of the fungus. Subpopulations with the highest virus incidence were Skudrinje (63%) and Jepiste (43%) in the Debar region, and Frangovo (46%) in the Struga region. Virus incidence in other subpopulations was much lower. To test whether the 12-kb dsRNAs are Cryphonectria hypovirus 1 (CHV-1), we subjected a sample of 27 isolates to reverse transcription (RT)-PCR and RFLP analyses. All 27 were identified as CHV-1 and belonged to the Italian subtype (subtype-I); all of these isolates were white in culture, typical of CHV-1-containing isolates. Most isolates had RFLPs identical to those previously found in other countries of southern Europe. Future studies will investigate hypoviruses from various origins in Macedonia for their biological control potential. Preliminary field surveys identified superficial cankers at all chestnut populations where CHV-1 was found.

Résumé

En Macédoine, des souches hypovirulentes de Cryphonectria parasitica, l'agent pathogène du chancre de l’écorce du châtaignier, ont été identifiées pour la première fois en 1995, plus de 20 ans après la première apparition du chancre du châtaignier. Entre 1995 et 2000, 488 isolats de C. parasitica furent rassemblés dans 19 sites de l'ensemble de la Macédoine. L'on rechercha alors la présence d'hypovirus dans ces isolats au moyen de l'extraction de l'ARN à double hélice (dsARN) puis d'une électrophorèse sur gel d'agarose. Du dsARN d'une longueur avoisinant 12 kb fut retrouvé dans 95 isolats de 8 sous-populations. Ce fut dans les sous-populations de Skudrinje (63%) et Jepiste (43%) de la région de Debar, et Frangovo (46%) de la région de Struga, que l'incidence de l'hypovirus fut la plus élevée. Dans les autres sous-populations, son incidence fut nettement inférieure. Une sélection de 27 hypovirus fut soumise à des analyses par RT-PCR et par RFLP. L'ensemble des 27 virus furent identifiés comme Cryphonectria hypovirus 1 (CHV-1), et relevant du sous-type italien (sous-type I). Les souches de C. parasitica infectées par ces virus prirent une couleur blanche en culture, typique des infections par le CHV-1. La majorité des hypovirus originaires de Macédoine présentèrent un profil RFLP identique à celui des hypovirus d'Europe du sud. Des études ultérieures examineront des hypovirus de différentes régions de Macédoine par rapport à leur potentiel de contrôle biologique du chancre de l’écorce du châtaignier. De premières observations sur le terrain ont démontré que l'on retrouvait des chancres superficiels dans l'ensemble des populations de châtaigniers où le CHV-1 était présent.

Zusammenfassung

In Mazedonien wurden Hypovirus-infizierte Stämme von Cryphonectria parasitica, dem Erreger des Kastanienrindenkrebses, zum ersten Mal 1995 identifiziert, mehr als 20 Jahre nach dem ersten Nachweis der Kastanienkrankheit. Zwischen 1995 und 2000 wurden 488 Isolate von C. parasitica an 19 Standorten in ganz Mazedonien gesammelt. Diese Isolate wurden mittels Extraktion von doppelsträngiger RNA (dsRNA) und anschließender Agarose-Gelelektrophorese auf das Vorhandensein von Hypoviren gestestet. In 95 Isolaten aus 8 Subpopulationen wurde dsRNA mit einer Länge von ca. 12 kb gefunden. Am häufigsten traten Hypoviren in den Subpopulationen Skudrinje (63%) und Jepiste (43%) in der Region Debar und in Frangovo (46%) in der Region Struga auf. In den anderen Subpopulationen war die Inzidenz des Hypovirus deutlich kleiner. Eine Auswahl von 27 Hypoviren wurde durch RT-PCR und RFLP Analysen typisiert. Alle 27 Viren wurden dem Cryphonectria hypovirus 1 (CHV-1) und innerhalb von CHV-1 dem italienischen Subtyp (Subtyp I) zugeordnet. Die C. parasitica Stämme, die diese Viren enthielten, zeigten die für CHV-1 Infektionen typische weiße Kulturmorphologie. Die meisten Hypoviren aus Mazedonien hatten identische RFLP Muster wie Hypoviren aus Südeuropa. In weiterführenden Studien werden Hypoviren aus verschiedenen Regionen Mazedoniens auf ihre Eignung für die biologische Kontrolle des Kastanienrindenkrebses geprüft. Erste Feldbeobachtungen zeigten, daßüberall dort, wo CHV-1 vorkommt, auch ausheilende Kastanienrindenkrebse gefunden werden.