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Keywords:

  • antioxidants;
  • DPPH;
  • TEAC;
  • lipid assay;
  • TBA

Synopsis

Many analytical methods are used to measure the antioxidative activity of substances yet little is known about the comparability of the test results between laboratories. After an initial evaluation of a broad range of methods conducted by one laboratory, the 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) assay, the trolox equivalent antioxidant capacity (TEAC) assay, the lipid assay (or 2,2′-azobis(2-aminepropane) (ABAP) assay) and the thiobarbituric acid (TBA) assay were selected to be evaluated in the interlaboratory study. The antioxidative potentials of trolox, tocopherol, lipochroman-6, ascorbic acid, 4-methyl-brenzcatechin, and/or 3,5-di-tert-butyl-4-hydroxytoluene (BHT) were assessed using each of the methods. These methods were then evaluated in respect of their reproducibility and classification properties. Based on the results of this study, the DPPH assay followed by the TEAC assay yielded the best results based on reproducibility and sensitivity both within one laboratory and between laboratories. The results of the interlaboratory study were then compared with the single center results obtained from the commercially available photochemolumiescence (PCL) kit. To assess the transferability of chemical data to biological systems, they were also compared with the single center results obtained using the cell-based Dichlorodihydrofluoresceine (DCFH) assay.

Résumé

Beaucoup de méthodes analytiques sont utilisées pour mesurer l'activité anti-oxydante de substances; toutefois peu d'information est disponible quant à la possible comparaison de résultats de tests entre laboratoires. Après une première évaluation d'une large variété de méthodes effectuées par un laboratoire, les méthodes suivantes à savoir le 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) assay, le trolox equivalent antioxidant capacity (TEAC) assay, le lipid assay (or 2,2′-azobis(2-aminepropane) (ABAP) assay) et le thiobarbituric acid (TBA) assay ont été sélectionnées pour être évaluées dans le cadre d'une étude inter-laboratoires. Le pouvoir anti-oxydant de trolox, tocopherol, lipochroman-6, ascorbic acid, 4-methyl-brenzcatechin et/ou BHT a étéévalué en utilisant chacune des méthodes. Ces méthodes ont ensuite étéévaluées par rapport à leur reproductibilité et leurs propriétés de classification. Sur la base des résultats de cette étude, les méthodes DPPH et ensuite TEAC ont donné les meilleurs résultats en termes de reproductibilité et sensibilitéà la fois au sein d'un même laboratoire et entre laboratoires. Les résultats de l’étude inter-laboratoires ont ensuite été comparés à ceux d'un seul centre obtenus avec le Kit PCL disponible commercialement. Pour évaluer la possibilité de transfert de données chimiques aux systèmes biologiques, ils ont également été comparés aux résultats d'un seul centre obtenus avec l'utilisation du test DCFH sur cellules.