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Development of the recombinase-based in vivo expression technology in Streptococcus thermophilus and validation using the lactose operon promoter

Authors

  • M. Junjua,

    1. Unité de Recherche, ‘Animal & Fonctionnalités des Produits Animaux’, Équipe ‘Protéolyse et Biofonctionnalités des Protéines et des Peptides’, UC INRA 340, Université de Lorraine, Vandœuvre-lès-Nancy, France
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  • W. Galia,

    1. Unité de Recherche, ‘Animal & Fonctionnalités des Produits Animaux’, Équipe ‘Protéolyse et Biofonctionnalités des Protéines et des Peptides’, UC INRA 340, Université de Lorraine, Vandœuvre-lès-Nancy, France
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  • N. Gaci,

    1. Unité de Recherche, ‘Animal & Fonctionnalités des Produits Animaux’, Équipe ‘Protéolyse et Biofonctionnalités des Protéines et des Peptides’, UC INRA 340, Université de Lorraine, Vandœuvre-lès-Nancy, France
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  • O. Uriot,

    1. Unité de Recherche, ‘Animal & Fonctionnalités des Produits Animaux’, Équipe ‘Protéolyse et Biofonctionnalités des Protéines et des Peptides’, UC INRA 340, Université de Lorraine, Vandœuvre-lès-Nancy, France
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  • M. Genay,

    1. Unité de Recherche, ‘Animal & Fonctionnalités des Produits Animaux’, Équipe ‘Protéolyse et Biofonctionnalités des Protéines et des Peptides’, UC INRA 340, Université de Lorraine, Vandœuvre-lès-Nancy, France
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  • H. Bachmann,

    1. NIZO food research, Health Department, Ede, the Netherlands
    2. VU University Amsterdam, Systems Bioinformatics, Faculty of Earth and Life Sciences, Amsterdam, the Netherlands
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  • M. Kleerebezem,

    1. NIZO food research, Health Department, Ede, the Netherlands
    2. Wageningen University, Host Microbe Interactomics Group, Wageningen, the Netherlands
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  • A. Dary,

    1. Unité de Recherche, ‘Animal & Fonctionnalités des Produits Animaux’, Équipe ‘Protéolyse et Biofonctionnalités des Protéines et des Peptides’, UC INRA 340, Université de Lorraine, Vandœuvre-lès-Nancy, France
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  • Y. Roussel

    Corresponding author
    1. Unité de Recherche, ‘Animal & Fonctionnalités des Produits Animaux’, Équipe ‘Protéolyse et Biofonctionnalités des Protéines et des Peptides’, UC INRA 340, Université de Lorraine, Vandœuvre-lès-Nancy, France
    • Correspondence

      Yvonne Roussel, Faculté des Sciences et

      Technologies, B.P. 70239 54506 Vandœuvre-lès-Nancy Cedex, France.

      E-mail: yvonne.roussel@univ-lorraine.fr

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Abstract

Aims

To construct and validate the recombinase-based in vivo expression technology (R-IVET) tool in Streptococcus thermophilus (ST).

Methods and Results

The R-IVET system we constructed in the LMD-9 strain includes the plasmid pULNcreB allowing transcriptional fusion with the gene of the site-specific recombinase Cre and the chromosomal cassette containing a spectinomycin resistance gene flanked by two loxP sites. When tested in M17 medium, promoters of the genes encoding the protease PrtS, the heat-shock protein Hsp16 and of the lactose operon triggered deletion of the cassette, indicating promoter activity in these conditions. The lactose operon promoter was also found to be activated during the transit in the murine gastrointestinal tract.

Conclusions

The R-IVET system developed in ST is relatively stable, functional, very sensitive and can be used to assay activity of promoters, which are specifically active in in vivo conditions.

Significance and Impact of the Study

This first adaptation of R-IVET to ST provides a highly valuable tool allowing an exploration of the physiological state of ST in the GIT of mammals, fermentation processes or dairy products.

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