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Keywords:

  • Leishmania ;
  • post-kala-azar dermal leishmaniasis ;
  • diagnosis;
  • slit aspirate;
  • real-time PCR;
  • rK39

Abstract

Objective

Confirmatory diagnosis of post-kala-azar dermal leishmaniasis (PKDL) is primarily based on invasive skin biopsy procedure. We evaluated the utility of minimally invasive slit aspirate specimen for serological and molecular diagnosis of PKDL. We compared the PKDL diagnosis using slit aspirate and skin biopsy specimens from the same patients.

Methods

Serological diagnosis using rK39 strip test was performed with serum and slit aspirate sample; molecular diagnosis for parasite detection and quantification was carried out by quantitative real-time PCR (Q-PCR) with skin biopsy and slit aspirate sample.

Results

The rK39 serological strip test was positive in all PKDL cases with both slit aspirate and serum samples (n = 50) and negative in all control cases (n = 24), giving a sensitivity of 100% (95% CI: 92.9–100%) and a specificity of 100% (95% CI: 86.2–100%). Quantitative-PCR detected parasite in all PKDL slit aspirates (n = 50, sensitivity = 100%, 95% CI: 92.9–100%) and tissue biopsies (n = 46, sensitivity = 100%, 95% CI: 92.3–100; it was negative in all controls including dermal tissues (n = 24) and slit aspirates (n = 24), giving specificity of 100% (95% CI: 86.2–100%). The parasite load in tissue and slit aspirate samples was significantly (P < 0.0001) correlated (r = 0.82).

Conclusions

Slit aspirates are a simpler and minimally invasive sampling technique for initial screening by serology followed by confirmatory diagnosis of PKDL with microscopy and/or Q-PCR. The simplified procedure has the potential for epidemiological studies and assessment of cure in PKDL.

Objectif

Un diagnostic de confirmation de la leishmaniose dermique post kala-azar (LDPKA) repose principalement des procédures invasives de biopsies cutanées. Nous avons évalué l'utilité de spécimen de ponction d'incision très peu invasive pour le diagnostic sérologique et moléculaire de la LDPKA. Nous avons comparé le diagnostic de la LDPKA utilisant des spécimens de ponctions d'incision et de biopsies cutanées des mêmes patients.

Méthodes

Le diagnostic sérologique à l'aide de bandelettes rk39 a été réalisé avec du sérum et des échantillons de ponction d'incision, le diagnostic moléculaire pour la détection des parasites et la quantification a été réalisée par PCR quantitative en temps réel (Q-PCR) sur des échantillons de biopsie cutanée et de ponction d'incision.

Résultats

Le test sérologique sur bandelette rk39 a été positive dans tous les cas de LDPKA, à la fois sur les échantillons de ponction d'incision et de sérum (n = 50) et négatif dans tous les cas témoins (n = 24), ce qui donne une sensibilité de 100% (IC95%: 92,9 à 100) et une spécificité de 100% (IC95%: 86,2 à 100). La Q-PCR a détecté des parasites dans toutes les ponctions d'incision de LDPKA (n = 50, sensibilité = 100%, IC95%: 92,9 à 100%) et les biopsies de tissus (n = 46, sensibilité = 100%, IC95%: 92,3 à 100; elle était négative dans tous les cas contrôles, y compris de tissus dermiques (n = 24) et de ponctions d'incision (n = 24), ce qui donne une spécificité de 100% (IC95%: 86,2 à 100%). La charge parasitaire dans les échantillons de tissus et de ponctions d'incision corrélaient significativement (P < 0,0001, r = 0,82).

Conclusions

Les ponctions d'incision sont une technique d’échantillonnage simple et peu invasive pour le dépistage initial par la sérologie suivie d'un diagnostic de confirmation de la LDPKA par la microscopie et/ou la Q-PCR. Cette procédure simplifiée a un potentiel pour les études épidémiologiques et l’évaluation de la guérison dans la LDPKA.

Objetivo

El diagnóstico confirmatorio de la Leishmaniasis cutánea Post Kala-azar (LCPK) está principalmente basado en un procedimiento invasivo de biopsia cutánea. Hemos evaluado la utilidad del aspirado de lesiones abiertas como muestra muy poco invasiva, para el diagnóstico serológico y molecular de LCPK. Hemos comparado el diagnóstico de LCPK utilizando aspirado y muestras de biopsias de piel de los mismos pacientes.

Métodos

Se realizó un diagnóstico serológico utilizando la tira reactiva rk39 con muestras de suero y muestras de aspirado de lesiones abiertas; diagnóstico molecular para la detección del parásito y cuantificación mediante una PCR cuantitativa a tiempo real (Q-PCR) con biopsia de piel y aspirado de lesiones abiertas.

Resultados

La prueba con la tira reactiva rk39 era positiva en todos los casos de LCPK tanto con las muestras de aspirado como las muestras de suero (n = 50) y negativa para todos los controles (n = 24), teniendo una sensibilidad del 100% (IC 95%: 92.9–100%) y una especificidad del 100% (IC 95%: 86.2–100%). La Q-PCR detectó parásitos en todas las muestras de aspirados de LCPK (n = 50, Sensibilidad = 100%, IC 95%: 92.9–100%) y biopsias de tejido (n = 46, sensibilidad = 100%, IC 95%: 92.3–100; y era negativa para todos los controles, incluyendo los tejidos cutáneos (n = 24) y aspirados (n = 24), mostrando una especificidad del 100% (IC 95%: 86.2–100%). La carga de parásitos en muestras de tejido y aspirados estaban significativamente correlacionadas (P < 0.0001) (r = 0.82).

Conclusiones

Los aspirados de lesiones abiertas son una técnica más simple y muy poco invasiva para realizar un primer cribado mediante serología, seguido por un diagnóstico confirmatorio de LCPK mediante microscopía y / o Q-PCR. El procedimiento simplificado tiene potencial para realizar estudios epidemiológicos y evaluación de la recuperación en LCPK.