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Keywords:

  • sleeping sickness;
  • cerebrospinal fluid;
  • Trypanosoma brucei gambiense ;
  • human African trypanosomiasis

Abstract

Objectives

Diagnosis of the neurological stage of human African trypanosomiasis is performed by examination of cerebrospinal fluid (CSF) for the presence of trypanosomes and numbers of white blood cells (WBC). Both CSF parameters are also used to assess treatment outcome during follow-up. In view of the importance of CSF examination, and the practical problems encountered with it, we compared the sensitivity of two trypanosome concentration techniques and the repeatability of two cell counting methods, as well as occurrence of systematic differences between them.

Methods

Patients were recruited at Dipumba hospital, in Mbuji-Mayi in the Democratic Republic of the Congo. In 94 CSF samples, trypanosome detection was performed with modified single centrifugation (MSC) and double centrifugation (DC). On 189 CSF samples with ≤30 cells/μl, cell counting was performed in duplicate in a Fuchs–Rosenthal counting chamber and in a disposable Uriglass counting chamber.

Results

Modified single centrifugation detected trypanosomes in significantly (P < 0.0001) more patients (85) than DC (46). Cell counts did not differ systematically in the two methods. Variability in the differences between duplicate cell counts was significantly higher (P = 0.002) in Uriglass (SD of differences 2.03) than in Fuchs–Rosenthal (SD of differences 1.62).

Conclusions

For analysis of CSF in the context of sleeping sickness stage determination and follow-up after treatment, we strongly recommend the MSC for parasite detection and the application of disposable counting chambers. When the first cell count is ≤20 cells/μl, we recommend repeating the counting procedure on the same CSF specimen and taking the average of both countings.

Objectifs

Le diagnostic du stade neurologique de la trypanosomiase humaine africaine est effectué par examen du liquide céphalo-rachidien (LCR) pour la présence de trypanosomes et pour le nombre de globules blancs (GB). Les deux paramètres du LCR sont également utilisés pour évaluer les résultats du traitement au cours du suivi. Compte tenu de l'importance de l'examen du LCR et les problèmes pratiques associés, nous avons comparé la sensibilité de deux techniques de concentration des trypanosomes et la reproductibilité de deux méthodes de comptage des cellules ainsi que les différences systématiques entre elles.

Méthodes

Les patients ont été recrutés à l'hôpital de Dipumba, à Mbuji-Mayi en République Démocratique du Congo. Sur 94 échantillons de LCR, la détection des trypanosomes a été réalisée avec la méthode Modifiée de Simple Centrifugation (MSC) et celle de la Double Centrifugation (DC). Sur 189 échantillons de LCR avec ≤30 cellules/μl le comptage des cellules a été réalisé en double dans une chambre de comptage de Fuchs-Rosenthal et dans une chambre comptage jetable Uriglass.

Résultats

La méthode MSC a détecté les trypanosomes chez significativement (P < 0,0001) plus de patients (85) que la méthode DC (46). Les comptages de cellules ne différaient pas systématiquement entre les deux méthodes. La variabilité des différences entre les comptages des cellules en double était significativement plus élevée (P = 0,002) avec Uriglass (écart type des différences: 2,03) qu'avec Fuchs-Rosenthal (écart type des différences: 1,62).

Conclusions

Pour l'analyse du LCR dans le cadre de la détermination du stade de la maladie du sommeil et le suivi après traitement, nous recommandons fortement la méthode MSC pour la détection des parasites et l'utilisation des chambres de comptage jetables. Lorsque le premier comptage des cellules donne un résultat ≤20 cellules/μl, nous recommandons de répéter la procédure de comptage sur le même échantillon de LCR et de prendre la moyenne des deux comptages.

Objetivos

El diagnóstico del estadío neurológico de la tripanosomiasis humana Africana se realiza mediante el examen del líquido cefalorraquídeo (LCR) en busca de la presencia de tripanosomas y el número de glóbulos blancos (GB). Los parámetros del LCR también se utilizan para evaluar los resultados del tratamiento durante el seguimiento. Dada la importancia del examen del LCR y los problemas prácticos para su realización, hemos comparado la sensibilidad de dos técnicas de concentración de tripanosomas y la repetibilidad de dos métodos de conteo celular, al igual que la ocurrencia de diferencias sistemáticas entre ellas.

Métodos

Los pacientes se reclutaron en el hospital de Dipumba, en Mbuji-Mayi en la República Democrática del Congo. Se realizó la detección de tripanosomas a 94 muestras de LCR mediante los métodos de Centrifugación Simple Modificada (CSM) y Centrifugación Doble (CD). En 189 muestras de LCR con ≤30 células/μl, el conteo celular se realizó por duplicado con una cámara de Fuchs-Rosenthal y en una cámara desechable de Uriglass.

Resultados

El método CSM detectó tripanosomas en un número significativamente (P < 0.0001) mayor de pacientes (85) que la DC (46). Los conteos celulares no diferían sistemáticamente entre los dos métodos. La variabilidad de las diferencias entre los duplicados de los conteos celulares era significativamente mayor (P = 0.002) con cámars Uriglass (DS de las diferencias 2.03) que con cámaras Fuchs-Rosenthal (DS de las diferencias 1.62).

Conclusiones

Para el análisis del LCR dentro del contexto de la determinación del estadío de la enfermedad del sueño y del seguimiento post-tratamiento, recomendamos el método de CSM para la detección de parásitos y la utilización de cámaras de conteo desechables. Cuando el primer conteo celular es de ≤20 células/μl, recomendamos repetir el procedimiento con la misma muestras de LCR y sacar el promedio de ambos conteos.