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Background

Studies comparing the ability of staining methods to detect eosinophils in formalin-fixed canine skin are lacking.

Hypothesis/Objectives

The aim of this study was to compare the effectiveness of eosinophil peroxidase monoclonal antibody (EPXmAb), Luna and haematoxylin and eosin (H&E) to detect eosinophils in fixed canine skin by assessing the following parameters: (i) specificity of eosinophil staining; (ii) extracellular eosinophil granule staining; (iii) tissue background staining; (iv) contrast between eosinophil and surrounding tissue staining; and (v) differences in the number of eosinophils detected by each stain.

Methods

Three serial sections of formalin-fixed, paraffin-embedded tissues of predominantly eosinophilic skin diseases (n = 8), noneosinophilic skin diseases (n = 7) and normal canine skin (n = 1) were stained with the three stains. Each parameter was independently assessed and scored by two investigators.

Results

Luna and EPXmAb were specific in detecting eosinophils. The EPXmAb was significantly more effective than Luna (< 0.001) and H&E (< 0.001) in its ability to detect extracellular eosinophil granules (i.e. to detect intact and released eosinophil granules). The EPXmAb showed significantly less background staining compared with Luna (= 0.0005). Moreover, significantly more stain contrast was noted with EPXmAb compared with Luna (= 0.003) and H&E (< 0.001). There was no significant difference between the mean eosinophil counts among the three stains.

Conclusion and clinical importance

The three stains were shown to be useful to detect and quantify eosinophils in fixed canine skin. The EPXmAb-based immunohistochemical stain proved to be a novel tool to detect eosinophils in canine skin.

Résumé

Contexte

Les études comparant la capacité des méthodes de coloration et de détection des éosinophiles dans la peau fixée dans du formol manquent.

Hypothèses/Objectifs

Le but de cette étude était de comparer l'efficacité de l'EPXmAb (eosinophil peroxidase monoclonal antibody), du Luna et de l'hémalun éosine (H&E) pour mettre en évidence les éosinophiles dans la peau canine fixée au formol par la mesure des paramètres suivants: (i) spécificité de la coloration éosinophile; (ii) coloration des granules éosinophiles extracellulaires; (iii) coloration de l'arrière-plan tissulaire; (iv) contraste entre la coloration éosinophile et le tissu périphérique; et (v) les différences dans le nombre d'éosinophiles détectés par chaque coloration.

Méthodes

Trois séries de sections fixées dans le formol et montées dans la paraffine de peau prélevées à partir de maladies cutanées éosinophiliques (= 8), non éosinophiliques (= 7) et de peau normale de chien (= 1) ont été colorées par le trois méthodes. Chaque paramètre était évalué indépendamment et noté par deux investigateurs.

Résultats

La détection d'éosinophiles était spécifique par Luna et EPXmAb. L'EPXmAb était significativement plus efficace que Luna (< 0.001) et H&E (< 0.001) dans leur capacité à détecter les granules éosinophiles extracellulaires (i.e détecter les granules éosinophiles intactes et libérées). L'EPXmAb a montré significativement moins de coloration de fond comparé à Luna (= 0.0005). En outre, un contraste de coloration significatif a été noté avec EPXmAb comparé à Luna (= 0.003) et H&E (< 0.001). Il n'y avait pas de différence significative entre les comptage d'éosinophiles moyens parmi les trois colorations.

Conclusion et importance Clinique

Les trois colorations se sont révélées utiles pour détecter et quantifier les éosinophiles dans la peau canine fixée. La coloration immunohistochimiques basée sur L' EPXmAb s'est révélé être un nouvel outil d'identification des éosinophiles dans la peau cutanée.

Resumen

Introducción

Faltan estudios comparando la eficacia de métodos de tinción para detectar eosinófilos en piel de perro fijada en formalina.

Hipótesis/Objetivos

El propósito de este estudio fue comparar la eficacia de un anticuerpo monoclonal frente a la peroxidasa de eosinófilos (EPXmAb), Luna y hematoxilina y eosina (H&E) para detectar eosinófilos en piel de perro fijada evaluando los siguientes parámetros: (i) especificidad de la tinción de eosinófilos, (ii) tinción de gránulos de eosinófilos extracelulares; (iii) fondo de la tinción en el tejido; (iv) contraste entre la tinción de eosinófilos y la tincion del tejido circundante; y (v) diferencia en el numero de eosinófilos detectado con cada tinción.

Métodos

Tres secciones seriadas de tejido fijados en formalina y metidos en bloques de parafina de enfermedades de la piel con predominio de eosinófilos (n = 8), enfermedades de la piel no eosinofílicas (n = 7) y piel normal de perro (n = 1) fueron teñidos con las tres tinciones. Cada parámetro fue evaluado de forma independiente asignando un valor por dos investigadores.

Resultados

Luna y EPXmAb fueron específicos para detectar eosinófilos. El EPXmAb fue significativamente mas efectivo que Luna (< 0.001) y H&E (< 0.001) en su capacidad para detectar gránulos de eosinófilos extracelulares (esto es, en detectar gránulos intactos y liberados de los eosinófilos). La tinción con EPXmAb mostró significativamente menos fondo comparado con el método de Luna (= 0.0005). Además, hubo un contraste significativamente mayor con EPXmAb comparado con Luna (= 0.003 y H&E (< 0.001). No hubo diferencia significativa entre el recuento medio de eosinófilos entre las tres técnicas.

Conclusiones e importancia clínica

Las tres tinciones mostradas son útiles para detectar y cuantificar eosinofilos en piel de perro fijada. La tinción inmunohistoquímica con EPXmAb es una nueva herramienta para la detección de eosinófilos en la piel canina.

Zusammenfassung

Hintergrund

Es gibt nicht viele Studien, die Färbemethoden zur Erkennung von Eosinophilen in Formalin-fixierter Hundehaut vergleichen.

Hypothese /Ziele

Das Ziel dieser Studie war es, die Effektivität monoklonaler Antikörper gegen eosinophile Peroxidase (EPXmAb), sowie die Lunafärbung und Hämatoxylin und Eosin (H&E) Färbung für Eosinophile in fixierter Hundehaut mittels folgender Parameter zu erfassen: (i) Spezifität der Eosinophilenfärbung; (ii) extrazelluläre Färbung eosinophiler Granula; (iii) Hintergrundfärbung des Gewebes; (iv) Kontrast zwischen den Eosinophilen und der Färbung des umgebenden Gewebes; und (v) Unterschiede bei der Anzahl der Eosinophilen, die in jeder Färbung gefunden werden.

Methoden

Drei Serienschnitte von Formalin-fixiertem, in Paraffin eingebettetem Gewebe von hauptsächlich eosinophilen Hauterkrankungen (n = 8), nicht-eosinophilen Hauterkrankungen (n = 7) und normaler Hundehaut (n = 1) wurden mit den drei Färbemethoden gefärbt. Jeder Parameter wurde unabhängig erfasst und von zwei UntersucherInnen beurteilt.

Ergebnisse

Luna und EPXmAb Färbungen waren spezifisch zur Erkennung von Eosinophilen. Die EPXmAb Färbung war signifikant effektiver als die Luna Färbung (< 0.001) und H&E (< 0.001) bei ihrer Fähigkeit extrazelluläre eosinophile Granula (i.e. intakte und freie Eosinophilengranula) zu finden. Die EPXmAb Färbung zeigte signifikant weniger Hintergrundfärbung im Vergleich zur Lunafärbung (< 0.0005). Weiters wurde signifikant mehr Färbekontrast bei der EPXmAb Färbung im Vergleich zur Luna (< 0.003) und H&E Färbung (< 0.001) festgestellt. Es bestand kein signifikanter Unterschied zwischen den durchschnittlichen Eosinophilenzählungen zwischen den drei Färbemethoden.

Schlussfolgerung und klinische Bedeutung

Es konnte gezeigt werden, dass alle drei Färbungen bei der Erkennung und Quantifizierung der Eosinophilen in fixierter Hundehaut nützlich waren. Die auf EPXmAb-basierende Immunhistochemie zeigte sich als neuwertige Methode, um Eosinophile in der Hundehaut zu finden.

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